RT-qPCR
Como funciona o padrão ouro usado para a detecção do vírus da COVID-19
Entenda o que é a RT-qPCR, por que ela é usada e como funciona essa técnica que se tornou essencial tanto na pesquisa científica quanto em testes virais
POR THABATA OLIVEIRA | 11/03/2026
A RT-qPCR é uma técnica que permite detectar e quantificar RNA.
Por que medir RNA?
Quantificação da expressão gênica
A RT-qPCR permite medir quanto um gene está sendo expresso em uma célula ou tecido. Ao quantificar o RNA produzido, é possível comparar a atividade gênica entre diferentes condições, como células saudáveis e doentes ou antes e depois de um tratamento.
VALIDAÇÃO DE RNAi (SILENCIAMENTO GÊNICO)
Quando um gene é silenciado por RNAi, a RT-qPCR é usada para verificar se isso realmente aconteceu. A técnica mede a quantidade de RNA do gene alvo: se os níveis diminuem, isso indica que o silenciamento foi eficaz e que o gene perdeu sua função.
Detecção de agentes patogênicos
A RT-qPCR é amplamente utilizada no diagnóstico de doenças infecciosas, especialmente aquelas causadas por vírus de RNA, como SARS-CoV-2 (causador da COVID-19). Ela detecta o material genético do patógeno na amostra, permitindo identificar infecções e, em muitos casos, estimar a carga viral.
Detecção de organismos geneticamente modificados
A RT-qPCR é amplamente utilizada no diagnóstico de doenças infecciosas, especialmente aquelas causadas por vírus de RNA. Ela detecta o material genético do patógeno na amostra, permitindo identificar infecções e, em muitos casos, estimar a carga viral.
Como funciona a RT-qPCR?
A RT-qPCR recebe esse nome porque ocorre em duas fases: primeiro a transcrição reversa (RT) e, em seguida, a PCR quantitativa (qPCR).
Primeiro o RNA é convertido em DNA complementar (transcrição reversa). Depois o DNA é amplificado em tempo real, enquanto um sinal fluorescente permite quantificar o material à medida que ele é produzido.
O processo pode ser dividido em etapas:
1. Extração do RNA
Tudo começa com a extração do RNA de células ou tecidos.
Esse RNA representa os genes que estavam ativos naquele momento.
2. Transcrição reversa (RT)
O RNA é convertido em DNA complementar (cDNA) por uma enzima chamada transcriptase reversa.
Transcriptase reversa
É uma enzima que usa o RNA como molde para sintetizar uma fita complementar de DNA. Nesse processo, forma-se inicialmente uma molécula híbrida de DNA/RNA, que depois dá origem ao cDNA de fita dupla.
3. qPCR (PCR QUANTITATIVA)
O cDNA entra na reação de PCR junto com:
- Primers (iniciadores específicos do gene)
- Uma molécula fluorescente
A cada ciclo:
- O DNA é amplificado (copiado)
- A fluorescência aumenta
Um equipamento mede essa luz em tempo real, permitindo acompanhar a amplificação.
4. Quantificação
O ponto-chave da análise é o Ct (Cycle threshold) — o ciclo em que a fluorescência ultrapassa um nível detectável.
- Ct baixo → havia muito RNA inicial → gene mais ativo
- Ct alto → havia pouco RNA → gene menos ativo
Ou seja, quanto mais cedo o sinal aparece, maior era a quantidade inicial de RNA.
Sigma-Aldrich. (n.d.). RT-qPCR. Merck. https://www.sigmaaldrich.com/BR/pt/technical-documents/technical-article/genomics/qpcr/rt-qpcr